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脾臟淋巴細胞分離試劑盒的操作說明

更新時間:2022-11-30      瀏覽次數(shù):680

脾臟淋巴細胞分離試劑盒的操作說明

規(guī)格:200 mL/kit

保存:本產(chǎn)品對光敏感,應該室溫避光儲存,保質(zhì)期2 年。無菌開封后,保存于室溫。

試劑盒組成:

各種動物脾臟淋巴細胞分離液 200mL

全血及組織稀釋液 200mL

細胞洗滌液 200mL

淋巴細胞分離方法(僅供參考)

1. 制備脾臟的單細胞懸液。

2. 取一支適當?shù)碾x心管,加入與脾臟單細胞懸液等量的分離液(分離液最少不得少于3 mL,總體

積不能超過離心管的三分之二,否則會影響分離效果)。

3. 小心吸取單細胞懸液加于分離液液面上,注意保持兩液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸

取單細胞懸液,然后小心的平鋪于分離液上,因為兩者的密度差異,將形成明顯的分層界面。)

4. 室溫,水平轉子500~900g,離心20~30min。(根據(jù)脾臟單細胞懸液的量確定離心條件,單細胞

懸液量越大,離心力越大,離心時間越長,具體離心條件可以自

行摸索,以達到最佳分離效果)。

5. 離心后,此時離心管中由上至下細胞分四層。第一層為稀釋

液層;第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細胞層;第三層為透明分離液

層;第四層為紅細胞層。

6. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細胞至另一潔凈的

15mL離心管中,向離心管中加入10ml細胞洗滌液洗滌白膜層細

胞,250g,離心10min。

7. 棄上清,5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞,250g,離心

10min。

8. 重復步驟7

9. 棄上清,細胞重懸備用。

脾臟單細胞懸液的制備方法(僅供參考)

脾臟研磨的方法:

1. 無菌條件下摘取脾臟,撕去脾臟被膜,用眼科剪將脾臟剪成小塊。

2. 將尼龍篩網(wǎng)或者是細胞過濾篩放置于平皿上,加入少量全血及組織稀釋液(保證脾臟及獲得的

細胞處于液體環(huán)境中)。

3. 將脾臟放置于篩網(wǎng)上,使用注射器活塞或者是無菌鑷子來研磨脾臟(盡量控制研磨力度,保持

篩網(wǎng)懸空,避免在皿底上直接研磨而造成大批細胞死亡)

4. 研磨后使用全血及組織稀釋液沖洗篩網(wǎng),收集細胞懸液,再經(jīng)濾網(wǎng)過濾。

注:

分層示意圖

第 2 頁 共 2 頁

A. 可用酶消化法,使用膠原酶對脾臟組織進行消化,得到單細胞懸液。

B. 如果最終得到的細胞需要培養(yǎng),那全過程所需試劑與器材均要求無菌。

C. 根據(jù)脾臟的體積控制單細胞懸液的濃度在108~109個/mL。

注意事項:

A. 開封前顛倒混勻,本分離液為無菌產(chǎn)品,為延長分離液保存時間,請在無菌條件下啟封,避免

微生物污染。

B. 分離液使用時應始終保持室溫(18℃~25℃),如室內(nèi)溫度較低,可將分離液預熱。4℃或者是

溫度較低的條件下離心,可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。

C. 待分離的組織要求新鮮,避免冷凍和冷藏。

D. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其帶有的靜電作用,可能會導致細胞掛壁,影響分離效果。

E. 如果要進一步對分離的細胞進行培養(yǎng),那在制備單細胞懸液和分離過程中,注意無菌操作,避

免微生物污染。


脾臟淋巴細胞分離試劑盒的操作說明


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