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放射免疫分析是由Yalow和Berson于1960年創(chuàng)建的標記免疫分析技術。由于標記物放射性核素的檢測靈敏性,本法的靈敏度高達ng甚至pg水平。測定的準確性良好,ng量的回收率接近100%。
放射免疫分析由于敏感度高、特異性強、精密度高、并可測定小分子量和大分子量物質,所以在醫(yī)學檢驗中應用極為廣泛,常用于測定各種激素(如甲狀腺激素、性激素、胰島素等)、微量蛋白質、腫瘤標志物(如AFP、CEA、CA-125、CA-199等)和藥物(如氯丙嗪、慶大霉素等)等。各種檢測項目均有試劑盒供應,所以在國內被廣泛采用。
放射免疫分析(RIA)是以放射性核素作示蹤劑的標記免疫分析方法,它具有高度靈敏性、特異性和性等特點,特別適用于激素、多肽等含量微少物質的超微量分析。自20世紀50年代末*以來,RIA被廣泛地應用于生物醫(yī)學的各個領域。
經典RIA是采用標記抗原和非標記抗原競爭性結合有*特異性抗體的反應。
RIA具體測定方法包括以下三個主要步驟:
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(一)抗原抗體反應
根據RIA原理,將未標記抗原(標準品和待測樣品)、標記抗原和特異性抗體加入反應試管中,在一定條件(溫度、時間及介質pH)下進行競爭抑制反應。
(二)分離結合與游離標志物
RIA反應平衡后,標記抗原與試劑抗體形成免疫復合物(B)。由于其含量極少,不能自行沉淀,因此需加入適當的沉淀劑才能將其*沉淀,然后經離心使其與游離的標記抗原(F)分離。某些小分子抗原,也可采用吸附法分離B與F。
理想的分離方法應分離*、迅速;分離試劑和過程不影響反應平衡,而且效果不受反應介質因素的影響;操作應簡單、重復性好以及經濟。
(三)放射性測量及數據處理
分離B、F后,既可對標記抗原抗體復合物(B)進行放射性測量,也可根據RIA實驗方法及目的,測定游離標記抗原(F)。繪制標準曲線(劑量-反應曲線),樣品管以其測量或計算的反應參數,通過標準曲線即可查出相應的待檢抗原濃度,目前已普遍采用計算機進行數據處理、自動繪制標準曲線和打印樣品抗原濃度。
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